益气养阴散结方含药血清对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响
益气养阴散结方含药血清对肺癌Ａ５４９细胞增殖与凋亡的影响
【摘要】目的探讨益气养阴散结方含药血清对人肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法应用MTT比色法检测益气养阴散结方对肺癌细胞增殖的抑制率，并用Annexin V/PI染色法检测凋亡率。结果药物组肺癌A549细胞的增殖明显弱于对照组(P＜0．05)，凋亡率明显高于对照组(P＜0．05)。结论益气养阴散结方含药血清能明显抑制A549细胞的增殖，并诱导其凋亡。
【关键词】肺肿瘤；血清药理学；细胞凋亡
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，预计到2025年，中国将成为肺癌患病率第一大国[1]。近年来，中药在肿瘤临床治疗中的作用引起了医学界的瞩目，合理开发和运用中医药的抗肿瘤作用成为研究的热点。
益气养阴散结方是湖北中医学院成肇智教授治疗肺癌的常用验方，为了进一步揭示其抗肿瘤的具体机制，本实验采用血清药理学方法，从细胞水平探讨益气养阴散节方对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。
1 资料与方法
1．1 细胞与细胞培养人肺癌A549细胞由武汉大学生命科学院惠赠。常规培养、消化、传代。
1．2 含药血清的制备益气养阴散结方由生黄芪、南沙参、莪术等组成，均购自湖北中医学院专家门诊部，传统方法煎制，浓缩为1 mg/ml。大、中、小剂量组分别按体质量以20 mg/kg、10 mg/kg、5 mg/kg给大鼠灌胃，2次/d，连续3 d，于末次给药后1 h，经右心室取血，通过离心取得含药血清[2]，置于-20℃保存备用。
1．3 方法
1．3．1 MTT比色法将细胞接种于96孔培养板中，每孔的细胞浓度为1×105/ml，待细胞长满单层后，分别加入大、中、小剂量含药血清及对照组血
清(不含药的大鼠血清)。每组6孔，培养48 h后，加入5 mg/ml的M TT20 μl，培养4 h。每孔加入DMSO200 μl，混匀，震荡培养板10 min。对照组调零，用酶标仪测各孔490nm波长光吸收值(OD值)，根据OD值判定含药血清对细胞增殖的影响。
1．3．2 Annexin V/PI法检测细胞凋亡将细胞接种于24孔培养板中，每孔的细胞浓度为1×105/ml，待细胞长满单层后，加入中剂量含药血清及对照组血清，培养48 h后，用0．25%胰蛋白酶消化收集细胞，按照Annexin V/PI凋亡
如何在组织中检测细胞增殖,分化和凋亡
在组织中检测细胞增殖、分化和凋亡的方法一、检测细胞增殖的方法 （1）直接方法：通过直接测定进行分裂的细胞来评价细胞的增殖能力 1、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR ）渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR ）是DNA 特有的碱基，也是DNA 合成的必需物质。用同位素3H 标记TdR 即3H-TdR 作为DNA 合成的前体能掺入DAN 合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN 的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE ）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE ）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使CFSE 成为一种良好的细胞标记物。CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm 激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 3、Brdu 检测法 Brdu 中文全名5- 溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA 合成期（S 期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu 单克隆抗体，ICC 染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义 4、增殖标志检测 有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增值细胞缺乏这些抗原，您也可以通过特异性的
单抗来对细胞增殖进行检测。例如，在人体细胞中，Ki-67 抗体识别同名蛋白，在细胞周期 S 期、G2 期和M 期表达，而在G0 期和G1 期（非增殖期）不表达。用针对Ki-67 蛋白的单抗就可以检测细胞的增值情况。由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括，增殖细胞核抗原PCNA 、拓扑异构酶IIB 和磷酸化组蛋白H3 。 （2）间接方法：通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力 1、MTT 检测法 MTT 检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT 分解成兰紫色的甲 （Formazan ），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。 2、ATP 检测 细胞内的ATP 含量受到了严格调控，检测ATP 也可以得到细胞增殖的信息。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP ，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP 浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase 及其底物荧光素luciferin 的ATP 检测以生物发光为基础，能够为您提供非常灵敏的结果。如果有ATP 存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP 浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。 二、检测细胞分化的方法 1 、流式鉴定细胞表面标志，以判断细胞是否分化 2、观察细胞形态，与已分化的细胞进行对比 3、分化诱导评估其分化能力
细胞的增殖、分化、癌变、衰老和凋亡
细胞的增殖、分化、癌变、衰老和凋亡 一、单项选择题： 1．下图为人体细胞的分裂、分化、衰老和凋亡过程的示意图，图中①—⑥为各个时期的细 胞，a —c 表示细胞所进行的生理过程。据图分析，下列叙述正确的是 A ．⑤与⑥的基因型相 同，蛋白质的种类也相同 B ．细胞的衰老与凋亡就会引起人体衰老与死亡 C ．若⑤⑥已失去分裂能力，则其细胞内遗传信息的流动方向为DNA →RNA →蛋白质 D ．与①相比，②的表面积与体积的比值增大，与外界环境进行物质交换的能力增强 2．下列关于观察减数分裂实验的叙述中，错误．． 的是 A ．可用蝗虫卵母细胞、蚕豆花粉母细胞的固定装片观察减数分裂 B ．用桃花的雄蕊比用桃花的雌蕊制成的装片中，容易观察到减数分裂现象 C ．能观察到减数分裂现象的装片中，可能观察到同源染色体联会现象 D ．用洋葱根尖制成装片，能观察同源染色体联会现象 3．动物和人体内具有分裂和分化能力的细胞称为干细胞。对下图的相关叙述中，错误的是 A ．a 过程表示干细胞能自我更新 B ．b 、c 过程表示干细胞具有分化能力 C ．a 、b 、c 过程中细胞的遗传信息表达情况不同 D ．b 过程形成的细胞直接组成器官，可供器官移植使用 4．为了观察减数分裂各时期的特点，实验材料选择恰当的是 ①蚕豆的雄蕊 ②桃花的雌蕊 ③蝗虫的精巢 ④小鼠的卵巢 A ．①② B ．③④ C ．①③ D ．②④ 5．下列关于植物组织培养的叙述中，错误．． 的是 A ．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B ．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C ．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D ．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 6．关于细胞生命历程的说法，错误．． 的是 A ．细胞分化由遗传物质控制 B ．细胞癌变过程中遗传物质发生改变 C ．细胞衰老过程中部分酶活性改变 D ．人在胚胎发育后期尾的消失是通过尾部细胞衰老死亡而实现的 二、多项选择题： 24．下列关于细胞衰老的说法正确的是 A ．生物体内绝大多数细胞都要经过未分化、分化、衰老和死亡这几个阶段 衰老、凋亡 a b b c c ① ② ③ ④ ⑤上皮细胞 ⑥骨骼肌细胞
BPRP研究思路和方法(有有关细胞凋亡与细胞增殖的内容)
BPRP在神经系统中作用的研究思路 2004.3.6 一、细胞水平实验 （一）PC12和SH-SY5Y细胞培养 PC12和SH-SY5Y细胞复苏时迅速从液氮中取出，置于37℃水浴中来回晃动使其尽快融化，置于含完全培养液的离心管中1000rpm离心5-10分钟，弃上清，沉淀用完全培养液悬浮并成混匀液，移于培养瓶(密度约5×105个/ml)，置37℃、5% CO 培养箱内培养，2天换液一次，约7天传代一次。完全培养液为高糖DMEM13.4 2 3.7 g，青霉素G 钠100 U/ml, 链霉素100 g/L，pH g，配成1000ml，内含NaHCO 3 7.2-7.4 ,加入10% 56℃灭活胎牛血清。待长满培养瓶单层后,用吸管轻轻吹打使其脱落并成混匀液,传代或接种置培养箱内继续培养进行以下实验。或冻存于9份完全培养液+1份DMSO（二甲基亚砜）中，4℃放置0.5小时，-20℃放置2小时，液氮口放置过夜，次日投入-196℃液氮中。（冻存密度>5×106个/ml）（二）实验研究 1.细胞增殖的研究 1.1增殖研究 1.1.1细胞培养于96孔培养板中，接种密度为5×103-2×104个/ml，每孔100ul，连续6天用MTT法检测细胞的增殖情况，终止培养前4小时每孔加入5mg/ml的MTT溶液15ul(终浓度为0.5-1mg/ml)，置孵箱终继续培养4小时，弃去培养液，在每孔终加入溶解液DMSO或无水乙醇100ul，置37℃振荡孵箱中充分溶解产物，约10分钟，在酶标仪上波长560nm检测每孔的光密度（OD）值。每次实验均应设与实验孔平行的空白对照，即除了不含细胞外其他条件相同的对照孔，最后比色时以对照孔调零。（给药前或给药后均可采用此方法研究） 1.2.2细胞接种于24孔培养板中，密度为1×105个/ml，每组设两个组，连续6天计数，采用台盼兰染色法：称0.4g台盼兰，加少量蒸馏水研磨，定量至100ml，0.22um滤膜过滤，4℃保存。加0.9ml细胞悬液和0.1％台盼兰于试管中，充分混匀后静置1-2min,不超过5min，计数后取平均值，以时间为横坐标，细胞数为纵坐标作图。（给药前采用此方法研究） 2凋亡研究 2.1活化的Caspase-3（半胱氨酸天冬氨酸酶）荧光染色法：细胞凋亡最早的特征性变化之一是Caspase酶的活化，凋亡细胞中32kD的Caspase-3原酶裂解为一个17-21kD的亚单位和一个12kD的亚单位，两个亚单位形成二聚体，即为活化的Caspase-3，因此可采用荧光染料标记抗活化的Caspase-3抗体来检测凋亡细胞并在流式细胞仪上进行样本分析。（Caspase-3抑制剂为AC-DEVD-CHO）。具体方法和步骤见《神经细胞培养理论和实践》211页，以及参考文献
四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究(精)
四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用 的比较研究 [ 08-05-16 15:17:00 ] 作者：马淼编辑：studa20 【摘要】目的比较新疆四种野生甘草活性成分对人乳腺癌细胞的增殖 抑制作用，以期筛选出药效最佳的甘草种类。方法采用MTT法检测不同样品对BCAP37细胞的增殖抑制作用，Hoechst33258荧光染色法检测各样品诱导BCAP37细胞凋亡的作用。结果4种甘草的活性成分对人乳腺癌BCAP37 细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用，且存在显著的种间与产地间差 异。结论抗癌药效最佳的甘草种类为阿拉尔甘草。 【关键词】甘草活性成分人乳腺癌BCAP 37细胞 Comparative Study on the Anti-proliferation and Apoptosis- inducing Effects of Active Components from Four Glycyrrhiza Species on Human Breast Cancer BCAP-37 Cell Abstract:ObjectiveTo select the optimal glycyrrhiza species for medicinal utilization by comparing the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects of active components from four wild glycyrrhiza species in Xinjiang on human breast cancer BCAP37 cell. MethodsThe anti-proliferation effects of different samples on BCAP 37 cell were measured by MTT assay. The cell apoptotic rate was detected by Hoechst 33258 stain.ResultsActive components of four Glycyrrhiza species inhibited the proliferation of BCAP37 cells and induced apoptosis significantly. What's more, there were significant interspecific and spatial variations in the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects. ConclusionThe optimal Glycyrrhiza species for anticancer utilization is Glycyrrhiza alalensis L. Key words:Glycyrrhiza; Active Component; Human breast cancer BCAP37 Cell 甘草是我国十分重要的中药材，素有“十方九草”的美誉。近年来，随着对甘草开发利用的不断深入，甘草被广泛用于药品、食品、保健品、化妆品 等领域［1］，甘草的市场需求量剧增。我国是世界上甘草出口大国，其中 80％为野生甘草，仅有20％为栽培甘草。我国甘草储量锐减，由建国初期 200～250万吨下降到50～70万吨［2］。现存的野生甘草资源已无法满足日益 增长的市场需求，因此，人工栽培甘草势在必行，野生优质甘草品种的筛选显
第八章 细胞增殖和凋亡异常与疾病
第八章细胞增殖和细胞凋亡异常与疾病 一、A型题 1．细胞凋亡的概念是 A．由体内外因素引起的细胞渐进、缓慢的病变导致的细胞死亡过程 B．由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程 C．由体内外因素诱导的一种生理性、主动的细胞死亡方式 D．由体内外因素引起的细胞急性、严重的改变导致的细胞死亡过程 E．由体内外因素诱导的一种病理性、被动的细胞死亡方式 [答案] B [题解] 细胞凋亡是指由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程。 2．有关细胞凋亡的生理和病理意义下列哪一项是错误的？ A．确保机体正常发育D．保证机体正常生长 B．维持内环境稳定E．发挥积极的防御功能 C．促进生物进化 [答案] C [题解] 细胞凋亡的生理和病理意义包括：①确保机体正常发育、生长；②维持内环境稳定；③发挥积极的防御功能；并不包括促进生物进化。 3．有关细胞凋亡的特征下列哪一项是错误的？ A．由较弱刺激触发，可见于生理或病理情况 B．DNA片段化，电泳时呈“梯”状条带 C．溶酶体相对完整，局部无炎症反应 D．主动过程，耗能，无需新蛋白合成 E．胞膜皱缩内陷，分割胞浆成凋亡小体 [答案] D [题解] 细胞凋亡不仅是一个主动过程，需要耗能，而且还需要有新蛋白质合成。 5．促进细胞凋亡的基因是 A．Bcl-2 D．c-myc B．Fas E．Bcl-XL C．突变型p53 [答案] B [题解] Bcl-2、突变型p53和Bcl-XL都是抑制凋亡基因，而c-myc是双向调节基因，只有Fas基因是促进细胞凋亡的基因。 6．抑制细胞凋亡的基因是（0.377，0.392，03临床） A．Fas D．Bcl-2 B．野生型p53 E．Bcl-Xs C．c-myc [答案] D [题解] Fas、野生型p53和Bcl-Xs是抑制凋亡基因，而c-myc是双向调节基因，只有Bcl-2是抑制凋亡基因。 10．细胞凋亡时发生的变化下列哪一项出现最早？ A．线粒体膜通透性增加D．核酸内切酶激活 B．线粒体跨膜电位下降E．核转录因子激活 C．凋亡蛋白酶激活 [答案] B [题解] 线粒体跨膜电位下降使线粒体膜通透性增加，随后才引起凋亡蛋白酶激活、核酸内切酶激活以及核转录因子激活。 11．细胞凋亡的双向调节基因是 A．野生型p53 D．Bcl-2 B．Fas E．Bax C．c-myc [答案] C [题解] 野生型p53、F as和Bax是促进凋亡基因，Bcl-2是抑制凋亡基因，而c-myc才是细胞凋亡的双向调节基因。 13．细胞凋亡的主要执行者是 A．核转录因子和核酸内切酶D．凋亡蛋白酶和谷氨酰胺转移酶
线粒体与细胞凋亡
线粒体与细胞凋亡 苑金香(潍坊学院生物系山东潍坊261043) 摘要 细胞凋亡是一种由基因控制的自主性死亡过程。近年来研究发现,线粒体在细胞凋亡过程中起重要作用,它可以通过改变膜通透性、释放凋亡活性物质等介导细胞凋亡。 关键词 线粒体 细胞凋亡 线粒体作为真核细胞能量代谢中心已为人熟知,然而近年来的研究发现,线粒体在细胞的另一重要生理活动 细胞凋亡中还扮演着重要角色。细胞凋亡即细胞程序性死亡(programmed cell death),是一种由基因编程调控的细胞主动自杀过程,细胞凋亡在胚胎发育、机体内环境的稳定、细菌和病毒感染细胞的清除过程中起重要作用,许多疾病的发生与细胞凋亡失控有关,而线粒体在细胞凋亡过程中起着重要作用。 1 线粒体膜的通透性改变与细胞凋亡 线粒体起着启动细胞凋亡的重要作用,其主要机制与线粒体渗透性转换孔(mitochondrial permeability transi tion pore,mtPTP)开放有关,mtPTP位于线粒体内膜和外膜的交界处,是一种由多种蛋白组成的复合体。mtPTP参与调节线粒体基质中的Ca2+、pH值电荷等,维持线粒体内环境的稳定性,保持氧化还原通路的畅通。mtPTP平时允许不大于0.15 104的小分子物质通过。当线粒体内Ca2+超载、自由基对线粒体膜造成氧化损伤,或者是能量产生下降时,均可引起mtPTP开放。在细胞凋亡发生早期,线粒体膜mtPTP打开,线粒体内膜电位( m)降低,一方面使得线粒体内的死亡促进因子(deathe-promoting factor,DPF)释放出来,促进凋亡的进行;另一方面,又使得细胞质进入线粒体基质,由此引起膜质子的转运异常,导致线粒体处于高渗状态,线粒体基质扩张,细胞骨架蛋白受压,直接导致细胞凋亡。 2 线粒体释放物与细胞凋亡 研究发现,线粒体内含有许多促死亡因子,包括细胞色素C,凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF),胱冬酶原及其他线粒体蛋白等。这些因子从线粒体中释放出来以后,以不同的方式参与到细胞凋亡的过程,影响细胞凋亡的进程。 2.1 细胞色素C的释放与细胞凋亡 1996年德克萨斯西南医学院研究中心王晓东研究小组发现细胞色素C参与细胞凋亡的过程。当细胞受凋亡信号刺激后,细胞色素C能迅速从线粒体释放到胞浆中,在细胞色素C含量丰富的细胞中,细胞将进入快速凋亡机制,释放出来的细胞色素C参与激活凋亡的酶通路,细胞内仍有许多未释放的细胞色素C,它们维持电子传递和有氧呼吸,从而产生足够的ATP,为细胞凋亡提供足够的能量。而在细胞色素C含量较少的细胞中,由于细胞色素C的大量释放,使电子传递链受阻,ATP产量骤减,无法提供足够的能量,因而使细胞走向与凋亡完全不同的坏死过程。 72h,凋亡细胞数从6.65%增加到16.42%;若处理96h 后,凋亡细胞数从4.71%增加到21.94%,这说明染料木黄酮可诱导前裂腺癌细胞的凋亡,通过这种办法可预防前列腺癌的发生。 另外,许多不同种类的化学物质(如亚硝胺类、杂环胺类、多环氮氢化物和糖醛核呋喃等)、外界微生物的侵袭、高温和放射线等化学的、物理的和生物的因素是影响癌细胞的生长和凋亡的外源性调节因素。还有一些常规使用的肿瘤化疗药物(如顺铂、维甲酸、羟基脲等)和 射线都可诱导多种肿瘤细胞凋亡。 4 结论 在正常机体内,细胞增殖和细胞凋亡处于一种动态平衡。故癌的发生和细胞的生与死密切相关。一方面,细胞的过度增殖导致了癌的发生,一些化学预防剂抑制癌发生的一个重要机制就是抑制细胞增殖;另一方面,细胞凋亡过程的失调也是癌发生的另一原因。研究细胞凋亡与癌发生的关系,进而诱导细胞凋亡对癌的预防具有重要的意义。 参考文献 1 Davis JN et al.Nutr Cancer,1998,32:123 131. 2 Li M et al.Cancer Epidemiol Biom Prev,2000,9(6):545 550. 3 方福德等.分子生物学前沿技术.北京医科大学、中国协 和医科大学联合出版社,1998,76 174. 4 贾旭东.细胞增殖和细胞凋亡和癌的发生和预防.国外 医学卫生学分册,2001,28(2):65 68. (B H) 17 2003年第38卷第5期 生 物 学 通 报
如何在组织中检测细胞增殖,分化和凋亡
在组织中检测细胞增殖、分化与凋亡得方法 一、检测细胞增殖得方法 (1)直接方法:通过直接测定进行分裂得细胞来评价细胞得增殖能力 1、胸腺嘧啶核苷(3H-ＴｄR)渗入法 胸腺嘧啶核苷(TdR)就是ＤNA特有得碱基,也就是DＮＡ合成得必需物质、用同位素３H 标记TdＲ即3H—TdR作为ＤNA合成得前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞得放射性强度,可以反映细胞DＡN得代谢及细胞增殖情况。但就是具有放射性、 2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CＦＳE)检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(ＣFＳE)就是一种可穿透细胞膜得荧光染料,具有与细胞特异性结合得琥珀酰亚胺脂基团与具有非酶促水解作用得羟基荧光素二醋酸盐基团,使ＣFＳE成为一种良好得细胞标记物。ＣFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内得氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CＦsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度就是亲代细胞得一半。这样,在一个增殖得细胞群中,各连续代细胞得荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在48８nm激发光与荧光检测通道可对其进行分析、 3、Ｂｒdu检测法 Brｄｕ中文全名５—溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶得衍生物,可代替胸腺嘧啶在DＮＡ合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,IＣＣ染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞得种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义 ４、增殖标志检测 有些抗原只存在于增殖细胞中,而非增值细胞缺乏这些抗原,您也可以通过特异性得单抗来对细胞增殖进行检测、例如,在人体细胞中,Ki—６7抗体识别同名蛋白,在细胞周期S期、G2期与M期表达,而在Ｇ0期与Ｇ1 期(非增殖期)不表达、用针对Ki-６7蛋白得单抗就可以检测细胞得增值情况、由于需要组织切片,这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们得青睐,因为它能够用来检测体内肿瘤细胞得增殖。其她普遍使用得细胞增殖或细胞周期调控标志还包括,增殖细胞核抗原PCＮA、拓扑异构酶IIB与磷酸化组蛋白H3。 (2)间接方法:通过检测样品中健康细胞得数目来评价细胞得增殖能力 １、MTT检测法 MTT检测法主要反映细胞得能量代谢,就是检测细胞增殖活力得一种简便准确得方法,其原理就是在活细胞生长与增殖过程中,线粒体内得脱氢酶可将黄色得MTT分解成兰紫色得甲(Foｒmazａn),生成得甲量得多少与细胞得数量与细胞得活力成正比。 2、ATP检测 细胞内得ATＰ含量受到了严格调控,检测ＡTP也可以得到细胞增殖得信息。死亡细胞或即将死亡得细胞几乎不含ATP,在细胞溶解物或提取物中测得得ATP浓度与细胞数之间存在严格得线性关系。利用荧光素酶ｌuｃifeｒaｓｅ及其底物荧光素lucｉferin得ＡＴＰ检测以生物发光为基础,能够为您提供非常灵敏得结果。如果有ATＰ存在荧光素酶就会发光,而且其发光强度与ＡＴP浓度成正比,用能读取发光信号得光度计与酶标仪都可以方便得进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测与筛选。 二、检测细胞分化得方法 1、流式鉴定细胞表面标志,以判断细胞就是否分化 2、观察细胞形态,与已分化得细胞进行对比 3、分化诱导评估其分化能力 三、检测细胞凋亡得方法 (1)形态学检测
肿瘤细胞凋亡的关系
第10卷 第1期中 华 男 科 学 Vol.10 No.1 2004年1月 National Journal of Andrology Jan.2004 ?论著? survivin 蛋白在前列腺癌中的表达及其与 肿瘤细胞凋亡的关系 高吴阳1,胡传义1,易慕华2 (三峡大学仁和医院,1.泌尿外科,2.病理科,湖北宜昌443001) 摘要: 目的:探讨新的凋亡基因survivin 蛋白在前列腺癌(PCa )的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。 方法:采用免疫组化SP 法和DNA 原位未端标记T UNE L 法分别测定42例PCa 组织及10正常前列腺(NP )组织中survivin 蛋白的表达和细胞凋亡。 结果:survivin 蛋白在PCa 中的阳性表达为80.59%,与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P <0.05),而NP 中无阳性表达;PCa 组织及NP 组织中细胞凋亡指数(AI )分别为3.03±1.33、1.07±0.77,其差异有显著意义(P <0.05);survivin 蛋白的表达与细胞AI 呈负相关(r =-0.679,P <0.001)。 结论:survivin 蛋白的异常表达而引起的细胞凋亡抑制,在PCa 的发生、发展中起一定的作用;联合检测survivin 蛋白和AI ,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价,以指导临床治疗及估计预后。关键词:survivin 蛋白;凋亡;前列腺癌;免疫组化 中图分类号:Q255;R737.25 文献标识码:A 文章编号:100923591(2004)0120012203 Expression of survivin Protein in Prostatic Carcinoma Tissues and Its Correlation with Apoptosis of Cancer Cells G ao Wuyang ,Hu Chuanyi ,Y i Muhua Department o f Urology (Gao WY ,Hu CY ),Department o f Pathology (Yi MH ),Rehe Hospital ,Three Gorges Univer sity ,Yichang ,Hubei 430031,China Correspondence to :Gao Wuyang Abstract : Objective :T o investigate the expression of survivin protein in the tissues of prostatic carcinoma and its correlation with apoptosis of cancer cells. Methods :Expression of survivin protein and apoptosis index (AI )were detected by immunohistochemical and terminal de 2oxynucleotidyl transterase 2mediated dUTP biotin nich end labeling (T UNE L )technique in the tissues of 42cases of prostatic carcinima (PCa )and 10cases of normal prostate (NP ). Results :Survivin prosteins were expressed in 34of the 42(80.59%)cases of PCa.The positive rate of survivin was strongly ass ociated with pathological grades ,clinical stages and lymphmetastasis in PCa (P <0.05).In contrast ,NP did not express survivin.Survivin protein expressioin was negatively correlated with AI in PCa (r =-0.679,P <0.001). Conclusions :Apop 2tosis inhibition by survivin may participate in the onset and progression of PCa ,and the detection of survivin protein and AI in PCa may help to evaluate the degree of cell diferentiation ,decide therapeutic strategies and estimate prognosis. Natl J Androl ,2004,10(1):12214K ey w ords :survivin protein ;apoptosis ;prostatic carcinoma ;immunohistochemistry 前列腺癌(prostatic carcinoma ,PCa )是男性泌尿生殖系肿瘤中最重要的一种,其病因和发病机制尚 ?21?收稿日期:2003207215;修回日期:2003210208 作者简介:高吴阳(19622),男,湖北宜昌市人,副主任医师,本科,从事泌尿男科学专业。通讯作者:高吴阳
细胞凋亡与肿瘤
细胞凋亡与肿瘤 巴桑卓玛 (西藏大学医学院基础医学研究所) 摘 要 细胞凋亡是一种进化保守的细胞死亡形式,不仅在正常的生理状态具有重要作用,而且与多种疾病的发生发展密切相关。近年来研究认为,细胞凋亡异常可能与肿瘤发生有关。凋亡调控基因已被看作是一类新的肿瘤发生相关基因。肿瘤的发生,是由于细胞增殖与细胞凋亡之间的平衡失调的结果,细胞凋亡在肿瘤生长过程中起负调控作用,因此研究抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡而对正常细胞影响不大是肿瘤治疗的新思路。 关键词 细胞凋亡 诱导 治疗 肿瘤 多细胞机体,包括人,均存在着细胞增殖与死亡的平衡,以维持机体的稳态,二者是一个矛盾的两个方面,此矛盾的运动发展推动着机体的生、老、病、死。传统的肿瘤研究者关注的首先是细胞的增殖。肿瘤细胞是永生性细胞,如何抑制肿瘤细胞的无限增殖能力,是他们首先考虑的问题。然而,机体还存在另一普遍现象,即死亡。细胞的死亡有两种形式,一种是病理性死亡,称为坏死(necrosis)。它是由于局部缺血、高热、理化因素及微生物的侵袭所致的细胞急速死亡。其重要的特点是细胞肿胀、溶解、释放出裂解产物,使周围组织产生炎症反应。另一种是生理性死亡———凋亡(apoptosis)。 1 细胞凋亡与一般的死亡有很大的不同,主要表现以下几个方面 形态学特征:细胞凋亡是细胞在生物体发育过程中,在一定诱导条件下接受指令而发生的程序化事件,是导致最终自我消亡的生命活动。发生时首先是染色质的凝集,嗜碱性染色增强,然后细胞核崩解,此时线粒体保持形态正常,最后细胞体积缩小,一部分细胞质和核碎片进入由膜包被的程序死亡小体,它们从细胞表面出芽脱落,并被组织专职巨噬细胞、上皮细胞吞噬。由于细胞内容物不泄漏,因而没有炎症反应。 生化特征:染色质降解,核小体间连接DNA部位被降解,产生寡聚核小体DNA 片段,即180-200bp整数倍的不同长度的DNA片断。 细胞凋亡的化学信号:在细胞程序死亡时出现快速持续的Ca2+浓度上升。如在胞质钙离子载体tributyrin和抗-CD3抗体诱导的胸腺细胞凋亡中就发现有钙离子浓度升高的现象。研究发现Ca2+增加与A TP一起作用于染色质,使原来折叠的很紧的染色质变松散,露出亲水部分,以便脱氧核糖核酸酶(Dnase)水解。Danson (1993)发现Ca2+可以参与Ca-calmokulin dependent phospatase作用,产生凋亡。Wornonicz提出Ca2+可以直接作用于核内转录因子引起凋亡。另外Ca2+还可活化
抗肿瘤药物对细胞增殖及凋亡的影响
抗肿瘤药物对细胞增殖及凋亡的影响 【摘要】 本实验室自主创新实验。本实验主要有药物对细胞对细胞增长速率的影响，药物对细胞周期时相分布及细胞凋亡的影响和细胞凋亡的形态学观察等三个内容。通过本次实验我们了解了细胞生物学研究的基本思路和理解设计实验的基本原则的同时通过实际操作，理解了细胞增值与凋亡在有机体正常生命活动中的作用及意义，掌握细胞增值与凋亡分析的基本方法。 一、药物对细胞对细胞增长速率的影响 【实验原理】 1.细胞生长曲线：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过潜伏期进入指数生长期。在细胞到达包和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。典型的生长曲线可分为潜伏期，指数增长期，稳定期和衰退期。以存活细胞数对培养时间作图，及得生长曲线，生长曲线常用与测定药物等外来因素对细胞生长的影响。 2.利用MTT比色法测定药物等外来因素对细胞生长的影响： 黄色的MTT能被活细胞线粒体脱氢酶还原成不溶鱼水的蓝紫色产物——formazan,后者被溶解所呈现的色度反映出活生活细胞的代谢水瓶，死亡细胞则没有脱氢酶活性。Formazan产生的量与活细胞数成正比。 【实验步骤】 1.溶液的配制： ①MTT母液 ②裂解液 ③药物与对照组：A（对照），B，C，D 实验步骤： 2.细胞制备： 取对数生长期的细胞，用胰酶消化计数，配制悬液浓度为2.5~3×10 个/ml。
3.细胞的接种（96孔板）： 设定调零组，对照组，假药组（8个平衡孔），每孔加入200ul细胞悬液。 4.加药处理：细胞贴壁后，弃培养基，换等体积的药液。 5.对细胞生长情况进行测定： ①配制MTT使用液：无血清的5ml培养基中加入600ulMTT母液避光混匀。②待测细胞孔，弃去培养基，每孔加100ulMTT使用液。没有细胞的孔同样重复上述操作，作为调零孔，继续培养。 6.第二天，每孔加入100ul裂解液，调零孔中也加 7.下午取出孔板，用移液器充分混匀，每孔取出150ul样品，转移到检测板中。用考热的针头挑破孔中的气泡，用酶标仪读取OD值。 8.计算每种药物的生长抑制率（细胞生长抑制率=（1—药物组OD值/细胞对照组OD值）×100%） 二、药物对细胞周期时相分布及细胞凋亡的影响 【实验原理】 流式细胞仪(Flow Cytometer):是集激 光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学技术以及单克隆抗体技术为一体的高科技细胞分析仪。流式细胞术(Flow Cytometry，FCM):利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的细胞或亚细胞结构进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。 2.PI荧光探针的特性： PI（碘化丙啶）为定量细胞化学的荧光染料，能插入双链DNA和RNA的碱基对之间，每隔5个碱基插入一个PI分子。如样品经RNA酶消化后，样品中的
高中生物 细胞的增殖、分化、衰老和凋亡
细胞的增殖、分化、衰老和凋亡 1.内容： （1）细胞的生长和增殖的周期性Ⅰ （2）细胞的无丝分裂Ⅰ （3）细胞的有丝分裂Ⅱ （4）细胞的分化Ⅱ （5）细胞的全能性Ⅱ （6）细胞的衰老和凋亡与人体健康的关系Ⅱ （7）癌细胞的主要特征及防治Ⅱ （8）植物细胞的质壁分离和复原Ⅱ 细胞细 胞 的 增 殖 有 丝 分 裂 细胞周期：连续分裂的细胞，从一次分裂结束开始到下一次分裂结束为止。 分裂间期 G1期：DNA合成前期相关RNA和蛋白质的合成 S期：DNA合成期DNA的复制 G2期：DNA合成后期相关RNA和蛋白质的合成 分裂期 前期 染色质高度螺旋化形成染色体 核仁核膜解体 出现纺锤丝，形成纺锤体 中期 染色体的着丝点整齐的排列在赤道板上 染色体形态固定，数目清晰，是观察染色体的最佳时期 后期 子染色体平均分配到两极 末期 染色体解旋形成染色质，纺锤丝消失 核膜、核仁重新出现，形成2个子细胞 动植物细胞有丝分裂的区别 前期：纺锤丝形成方式不同 后期：子细胞形成方式不同 无丝分裂 特点：无纺锤体和染色体的出现 过程：核延长缢裂、整个细胞从中部缢裂，形成两个细胞 代表：蛙的红细胞、原核细胞 减数分裂：与配子细胞的形成有关 细 胞 的 分 化 功能上发生一系列稳定性差异的过程 特征:具有持久性、稳定性和不可逆性。 意义：是生物个体发育的基础
第一课时 细胞的增殖 一、细胞不能无限长大 1.相对表面积决定：表面积/体积 体积越大相对表面积越小，物质运输速率就越低。 2.核质比 二、细胞通过分裂进行增殖 1.意义：是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础。 2.过程：包括物质准备和细胞分裂整个连续的过程。 3.方式：真核细胞的分裂方式包括：有丝分裂、无丝分裂、减数分裂三种。 三、有丝分裂 1.细胞周期：连续分裂的细胞，从一次分裂完成开始到下一次分裂完成为止，为一个细 细胞全能性 概念：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能 原因：以分化的细胞具有本物种全套的遗传物质 实例：已分化的植物细胞具有发育成完整个体的全能；高度分化的动物细 胞无全能性，但细胞核具有全能性。 干细胞：动物和人体内保留着少量具有分裂和分化能力的细胞。 全能性比较：植物细胞>动物细胞；受精卵>配子细胞>体细胞 细胞的衰老 细胞衰老与个体衰老的关系：单细胞生物细胞衰老即为个体的衰老；多细胞生物，细胞衰老不代表个体的衰老，只有绝大多数细胞衰老，生物体才衰老。 特征 1. 细胞内水分减少，细胞萎缩，体积变小，新陈代谢的速率减慢 2. 细胞内多种酶的活性降低 3. 细胞内色素逐渐积累 4. 细胞内呼吸速率减慢，细胞体积增大，核膜内折，染色质收缩、染色加深 5. 细胞膜通透性改变，物质运输功能降低 细胞的凋亡 概念：由基因决定的细胞自动结束生命的过程 意义：对于多细胞生物体完成正常发育，维持内部环境的稳定，以及抵御外界各 种因素的干扰都有非常关键的作用 细胞的癌变 概念：有的细胞受到致癌因子的作用，细胞中的遗传物质发生变化，就变成不受 机体控制的、联系分裂的恶性增值细胞。是细胞畸形分化的结果 主要特征 1. 适宜条件下，无限增殖 2. 细胞的形态发生显著变化 3. 癌细胞的表面发生了变化：糖蛋白减少 4. 酶的活性升高 致癌因子 1.致癌因子：紫外线、 X 射线等 2.致癌因子：亚硝胺、黄曲霉毒素 3.致癌因子：如Rous 内瘤病毒等 细胞癌变的原因：致癌因子使原癌基因和抑癌基因发生突变
2018年高考生物分类试题及答案汇编知识点5 细胞的增殖分化衰老癌变和凋亡
温馨提示： 此套题为Word版，请按住Ctrl,滑动鼠标滚轴，调节合适的观看 比例，答案解析附后。关闭Word文档返回原板块。 知识点5 细胞的增殖、分化、衰老、癌变和凋亡 1.(2018·全国卷Ⅰ·T4)已知药物X对细胞增殖有促进作用,药物D 可抑制药物X的作用。某同学将同一瓶小鼠皮肤细胞平均分为甲、乙、丙三组,分别置于培养液中培养,培养过程中进行不同的处理(其中甲组未加药物),每隔一段时间测定各组细胞数,结果如图所示。据图分析,下列相关叙述不合理的是()
A.乙组加入了药物X后再进行培养 B.丙组先加入药物X,培养一段时间后加入药物D,继续培养 C.乙组先加入药物D,培养一段时间后加入药物X,继续培养 D.若药物X为蛋白质,则药物D可能改变了药物X的空间结构 【解题指南】(1)由曲线图分析知:乙组细胞数增加较快,乙组应加入了促进细胞增殖的药物。 (2)经曲线对比知:丙组细胞数开始一段时间内增加速度同乙组,所以丙组先加入药物X(促进),培养一段时间后较乙组细胞数增加速度慢,加入药物D(抑制),继续培养。 【解析】选C。本题考查细胞增殖、蛋白质变性和科学思维能力。根据图示,乙、丙两组的细胞增殖速度都大于甲组,且开始一段时间内乙、丙两组增殖速度相同,- 1 - 所以两组均为先加入药物X,而丙组培养一段时间后细胞增殖速度低于乙组,说明丙组培养一段时间后又加入了药物D;药物D可抑制药物X的作用,可能是药物D改变了药物X(蛋白质)的空间结构。综合上述分析,C项叙述不合理。 2.(2018·全国卷Ⅱ·T6)在致癌因子的作用下,正常动物细胞可转变为癌细胞。有关癌细胞特点的叙述错误的是() A.细胞中可能发生单一基因突变,细胞间黏着性增加 B.细胞中可能发生多个基因突变,细胞的形态发生变化 C.细胞中的染色体可能受到损伤,细胞的增殖失去控制 D.细胞中遗传物质可能受到损伤,细胞表面糖蛋白减少
细胞增殖、凋亡、粘附的测定方法
细胞增殖的检测方法: 四甲基偶氮唑盐法(MTT) MTT 商品名为噻唑蓝, 就是一种黄色的染料。1983 年Mosmann 建立MTT比色法,用于检测细胞存活与增殖。其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为不溶于水的蓝紫色结晶-甲瓒(formazan)并沉积在细胞中,而死亡的细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数量范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测、肿瘤细胞的生长、生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定[4-8]等。此方法简便、灵敏且无放射性。 MTT 溶液需要放置在4℃避光保存,最好就是现用现配。由于MTT 经还原所产生的产物甲瓒不溶于水,无法直接测定吸光度,需要被溶解之后才能检测。这不仅使工作量增加,而且MTT 溶液具有致癌性。需要注意的就是,MTT 法只能用来检测细胞相对数与相对活力, 但不能测定细胞的绝对数。另外, 有研究发现过氧化物会降低MTT 测定的准确度,抑制将近95%的MTT 与O2－的反应,MTT 溶解产物甲瓒会吸附在纳米纤维上, 而致使检测的结果呈现假阴性。 内盐法(MTS) MTS 就是一种新型的MTT 类似物。MTS 在偶联剂PMS 存在的条件下, 可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成水溶性的有色甲瓒产物, 其颜色深浅与活细胞数量在一定范围内呈高度相关,可用酶标仪检测。它的优点在于无放射性、快速、安全、方便、灵活及特异性强,同时又克服了MTT、XTT 的缺点。此方法已应用于细胞增殖的检测、药物敏感性试验、细胞毒性的检测等,且比MTT 法更加准确。 此方法在一定程度上也存在缺陷。最新研究表明在96 孔板试验中, 靠外的孔液体易蒸发,对检测结果有一定影响[24],且不适合于猪淋巴细胞促有丝分裂反应的检测、 细胞粘附能力测定: 蛋白染料染色法测细胞粘附 本法就是以蛋白染色剂如氨基黑10B来问接测定96孔板中的细胞数目,该法迅速可靠,还可用怍细胞形态学观察与染色细胞的照像。Schulz 等对入角化细胞株
细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展
多细胞机体，包括人，均存在着细胞增殖与死亡的平衡，以维持机体的稳态，二者是一个矛盾的两个方面，此矛盾的运动发展推动着机体的生、老、病、死。细胞凋亡是多细胞生物体的一种重要的自稳机制。它可以主动地清除多余的特异性或分化能力与机体不相适应的，以及已经完成功能而又不再应用的细胞；清除有潜在危险的细胞，如自身反应性淋巴细胞，DNA损伤又得不到修复有癌化危险的细胞等。故凋亡是调节生物体正常发育不可缺少的一种机制，此种调节一旦失败会导致机体疾病，肿瘤的发生甚至死亡。 细胞的死亡有两种形式，一种是病理性死亡，称为坏死(necrosis)。它是由于多种致病因子如局部缺血、理化因素及生物因子的作用所致的细胞急速死亡。其重要的特点是细胞肿胀、溶解、释放出裂解产物,使周围组织产生炎症反应。另一种多发生于生理情况下，故称为生理性死亡——凋亡(apoptosis)，又称程序性死亡(programmedcell death，PCD)。1972年Kerr最先提出这一概念。 肿瘤细胞是永生性细胞，肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖和分化有关，也与细胞凋亡的异常有关。1972年Kerr等人在提出凋亡概念的同时预测:恶性肿瘤中的自发凋亡可能会涉及到导致肿瘤消退的治疗作用[1]。 1 细胞凋亡细胞凋亡属诱发行为，其诱因很多，如DNA损伤、生长因子撤除、糖皮质激素作用、FasL以及TNF作用、细胞间接触等。细胞凋亡的机制极为复杂，除了涉及诸如凋亡因子、受体、适配蛋白、启动蛋白、效应蛋白、抑制蛋白等多种蛋白的相互作用外，还涉及到线粒体和内质网。 研究发现细胞凋亡主要有2条独立的凋亡途径。一条是通过死亡受体激活途径。死亡受体即细胞膜表面的某些蛋白质，它们能与携带凋亡信号的专一性配基结合，并迅速将凋亡信号转导至细胞内而诱导细胞凋亡。另一条通路是线粒体-细胞色素C途径。线粒体释放的细胞色素C能与Apaf-1及Caspase-9形成复合体(凋亡小体)，在dATP 、ATP存在下激活caspase-3，启动caspase级联 细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展 李娜 高俊岩 刘敏 [摘要] 细胞凋亡的过程极为复杂，是调节机体正常发育的重要机制，涉及一系列调控因子。这些调控因子在维持细胞自稳中发挥重要作用。肿瘤的发生，发展与治疗也受到与多凋亡调控蛋白的调控。本文综述了关于细胞凋亡及肿瘤的一些调控机制，望从对凋亡调控蛋白的研究中，进一步阐明凋亡的作用机理，为肿瘤以及其它一些恶性疾病的治疗提供理想的途径。 [关键词] 细胞凋亡；肿瘤 [Abstract] Apoptosis is a very complex process. It accommodates the body to grow normally by many regulators. It is important that by these regulators the body can keep steady. Also by these regulators we can control the tumor and cure the tumor. This review summarized some regulations of apoptosis and tumor. By this study we want to know more about the mechanism of apoptosis and offer perfect therapy for tumor. [Key words] Apoptosis; tumor 反应，诱导细胞凋亡[2]。 1.1 死亡受体途径及其调控 凋亡细胞表面有特定的感应器即死亡受体, 死亡受体可以接受胞外的死亡信号而激活细胞内的凋亡。细胞受到某些凋亡信号的刺激,Fas(CD95)通过与其特异性配体FasL(CD95L)结合而在细胞膜表面发生聚合,形成的复合物通过FADD与Caspase-8特异的结构域结合并使Caspase-8形成二聚体而自身激活，Caspase-8释放到胞浆中激活效应型Caspase-3,6,7,导致细胞凋亡。还有研究发现，Caspase-8可把bcl-2家族的Bid切割成tB id, tB id能促进线粒体释放细胞色素c。释放到胞浆的cytc激活caspase-9，caspase-9再激活效应 caspase，导致细胞凋亡[3] 。 TNFR的衔接子是TRADD。TRADD又可与另两个衔接子结合：一个是FADD，另一个是RIP，RIP与TRAF2结合后进入核，通过信息的不同通路，可能经NFkB因其凋亡。 1.2 线粒体-细胞色素C途径 当线粒体受到氧化剂、神经酰胺、钙离子、某些胱天酶、Bax等刺激后，释放出细胞色素-C， 从而活化Apaf-1[4] 。活化的Apaf-1通过与CARD-CARD的相互作用活化Caspase-9，随即Caspase-9酶切Caspase-3原，导致细胞凋亡。 大量证据表明，细胞色素C从线粒体释放至胞质是引发凋亡的关键步骤。凋亡过程中细胞色素C的释放是线粒体外膜通透性增高的结果。关于细胞色素C释放的具体机制，目前主要有两种假说：①线粒体外膜蛋白聚合形成膜通透转运孔(PTP)复合体，导致外膜非特异性断裂；②Bcl-2家族蛋白形成通道，调控细胞色素C 释放。 2 肿瘤的调控正常人体组织、细胞的生长受到精确的调控。而肿瘤细胞具有无限生长的特性。通过研究证实，肿瘤细胞的无限生长是肿瘤细胞凋亡受抑制的结果，因而凋亡障碍同肿瘤的发生、发展具有密切的关系。凋亡是体内细胞平衡的一个关键要素，通过消除不健康的细胞而达到平衡。 2.1 抗凋亡因素的调控 2.1.1 Bcl-2与肿瘤细胞凋亡调控Bcl-2家族成员都含有1～4个Bcl-2同源结构域(BH1～4)。其中BH4是抗凋亡蛋白所特有的结构域，BH3是与促进凋亡有关的结构域。根据功能和结构可 作者单位：100037 海军总医院检验科 (李娜 刘敏) 100053 北京卫生学校 (高俊岩)